PCR Nedir ? Doktorlar Neden PCR Testi İster ?

  • Genel Sağlık
  • PCR Nedir ? Doktorlar Neden PCR Testi İster ? için yorumlar kapalı
  • 1.117 kez görüntülendi

PCR Nedir ? Doktorlar Neden PCR Testi İster ?

PCR, açılımı polimeraz zincir reaksiyonu, basitçe bir tüp içerisine gerekli enzimleri ve kimyasalları ekleyerek ve de belli seviyede ısıların uygulanması aracılığı ile DNA ve RNA’nın kopyalanması ya da çoğaltılması için kullanılan etkili ve sonuç veren bir testtir.

PCR Testi Kısaca

Yaşam editörleri tarafından hazırlanan hastalık kartlari ilgili hastalığa ait en çok merak edilen sorulara kısaca yanıt verir.

  • Dikkat
  • Normal
Şüpheli Cinsel İlişki Sonrası PCR Testi Yaptırmalı Mıyım ?

PCR testi, doktorların hastaları teşhis ve tedavi etmesine yardımcı olan birçok farklı tıbbi soruna cevap verebilecek bir dizi testin temelini oluşturmaktadır. Şüpheli cinsel ilişki için erken teşhis koyulabilen tek testtir.

PCR Testi Fiyatları

Laboratuvarların ortalama fiyatlandırmaları 700 ₺ civarında değişmektedir.

PCR ve PCR Yöntemi Nedir?

PCR, açılımı polimeraz zincir reaksiyonu, basitçe bir tüp içerisine gerekli enzimleri ve kimyasalları ekleyerek ve de belli seviyede ısıların uygulanması aracılığı ile DNA ve RNA’nın kopyalanması ya da çoğaltılması için kullanılan etkili ve sonuç veren bir testtir.

Özetle bir tüp içerisine gerekli enzimler konularak ve doğru ısılar uygulanarak çok az miktardaki DNA’yı bile istenildiği kadar çoğaltabilirsiniz.

Genetik tanı, gen klonlaması, babalık tayini, nokta mutasyonları analizi, prenatal tanı da ve birçok diğer uygulama alanı olması nedeniyle çok önemli bir keşif olarak biyoloji biliminde yeni ufuklar açmıştır.

PCR Nasıl Yapılır? Prosedürü Nedir?

PCR, DNA’nın belli bir bölgesini çoğaltan bir yöntemdir. Prosedür için bir tüp içerisine çoğaltılması hedeflenen DNA kalıbı, genellikle ısıya dayanıklı olduğu için kullanılan Taq polimerazı  gibi çoğaltıcı bir enzim, 2 DNA primeri, dNTP (deonükleosid trifosfat), bir tampon çözelti, +2 yüklü bir katyon (genellikle Mn+2 ya da Mg+2) ve bir değerlikli bir katyon (genellikle K, potasyum).

Prosedür çeşitli evrelerden oluşur:

Bu evrede DNA polimerazının aktifleşmesi için ısı uygulanmasını içerir.
Bu evre ilk düzenli döngüdür 94oC ile 98oC ısı döngüsünü oluşturur 20 ile 30 saniye boyunca. Bu DNA erimesine yol açar ve iki yapılı DNA çözülerek hidrojen bağlarını koparır.
Bir sonraki adım olarak ısı 50oC ila 65oC seviyesine indirili 20 ika 40 saniye boyunca. Böylece tek yapılı DNA şablonu tavlanmış olur.
Bu evrede kullanılacak ısı kullanılan DNA polimerazına bağlıdır. Sıklıkla kullanılan Taq polimerazı için gereken yaklaşık sıcaklık 75oC ile 80oC arasındadır. Bu adımda DNA polimerazı, DNA kalıbı ile sentezlenmeye geçer.
Bu tekli adım opsiyoneldir ama son PCR döngüsünden sonra kalan dokunulmamış DNA’nın tananeb gerilmesi için 70oC ile 74oC arasında 5 ila 15 dakika arasında işlenmeye devam edilir.
Son adım reaksiyon halkasını 4oC ile 15oC’ye kadar soğutulur belirsiz bir sürede ve kısa süreli saklama kaplarına yerleştirilir.

PCR Testi 

Polimeraz zincir reaksiyonuna (PCR) dayanılarak yapılan PCR testi incelenen DNA’nın arttırılmasını sağlayarak bu DNA’da aranan maddelerin bulunmasını kolaylaştırır.

Örneğin HIV (Aids) testi için bireyden alınan örnek PCR testi ile çoğaltılarak ölçülebilir ve tanımlanabilir duruma getirilir. Bireyin kanında antikor üretilip üretilmediğini gözlemleyen Elisa testinin aksine PCR testi erken dönemde virüse sahip olduğu halde bu virüse antikor üretmeyen kişilerde 9 ila 11 gün içinde HIV virüsü olup olmadığını saptayabilmektedir.

PCR testinin 28. Günden itibaren virüsü saptayabilme duyarlılığının yaklaşık olarak %98 ile %100 olduğu görülmüştür.

HIV PCR Testi Fiyatı

HIV PCR testinin fiyatları ise Sağlık Bakanlığının talimatları sebebiyle direk olarak yayınlanmamaktadır. Lakin internetten bu testleri yapan laboratuarlarla iletişime geçildiği takdirde hızlı bir şekilde cevap alınabilir ve fiyat konusunda bilgi edinilebilir. Laboratuvarların ortalama fiyatlandırmaları ise 700 ₺ civarında değişmektedir.

Bir Doktor Neden PCR Testi İster?

PCR testi, hekimlerin hastaları teşhis ve tedavi etmesine yardımcı olan birçok farklı tıbbi soruna cevap verebilecek bir dizi testin temelini oluşturmaktadır. Örneğin, PCR testleri, özellikle de (örneğin HIV ve diğer virüsler ve bazı mantarlar) yetiştirilmesi zor olan hastalarda patojenik organizmaları tespit edebilir ve tanımlayabilir.Doktorlar, genetik hastalıkların teşhisine yardımcı olmak için PCR testleri isterken, diğer yandan, çocukların ebeveynlerini tanımlamak gibi biyolojik ilişkileri saptamak için PCR kullanırlar. PCR testleri, belirli kanserlerde bulunan genetik mutasyonları ve yeniden düzenlemeleri tanımlamak için de kullanılır.

Bununla birlikte, PCR testleri, evrimsel biyoloji, genetik parmak izi, adli araştırmalar ve diğerleri gibi bilimsel araştırmaların pek çok yönüne değiştirilmiş ve genişletilmiştir.


PCR Çeşitleri

Temel PCR sürecidir. DNA ya da RNA’nın milyarlarca kopyasını oluşturur. Sonuçlar sadece sürecin sonunda görülebilir.
Sınırlama enzimlerini kullanarak DNA’yı küçük parçalarına ayırmayı, PCR yöntemiyle bu parçaların çoğaltılmasını ve ardından jel elektroforez kullanımıyla bu parçaların analizini içeren yöntemdir.
Bu yöntem bir mutasyonla eşleşmesi için tasarlanmış, türgen spesifik primerleri kullanır.
Alu öğelerini (genellikte DNA’nın tekrar eden bölümlerini) seçen primerlerin kullanıldığı ve bu bölümler arasındaki DNA parmak izinin çoğaltıldığı yöntemdir.
Aynı zamanda polimeraz döngü montaj ya da PCA olarak da bilinir. PCR’ı daha uzun DNA segmentleri inşa etmek için kullanır üst üste binmiş primerlerle.
Hedeflenmiş DNA’dan sadece bir iplik daha fazla üretir.
Bir plazmit ile transformasyondan sonra bakteri kolonilerini ayırmak için kullanılır.
Reaksiyon başlayana kadar Taq polimerazını inaktif tutar, ısı tarafından denşirilen antikorları kullanır.
Lama yerleştirilmiş hücrelerde ya da dokuda gerçekleşen PCR.
Normalin tersi yönde yerleştirilmiş primerleri kullanarak bilinen sekansın yanındaki DNA’nın çoğaltıldığı teknik.
Sekanslar arasında gen boyunca tekrarlayan DNA’nın çoğaltılması.
PCR teknikleri tek ipli DNA yaratımı.
Daha uzun DNA parçalarını çoğaltmak için karışık polimeraz kullanımı.
Metillenmiş ve metillenmemiş DNA’ları birbirine bağlamak için iki primer çifti kullanılır.
Başlangıçtaki 30 ya da 35 PCR döngüsünden sonra, orijinal primerlerin içerisine ‘yuvalanmış’ yeni primerler kullanılarak fazladan bir tur PCR daha yapılır. Bu süreci daha hassas kılar, çünkü primerlerin yanlış bölgelere bağlanmasını engelleyerek istenmeyen ürünler ortaya çıkmasını riskini azaltır.
Gendeki tekrar eden kodlanamayan dna sekanslarını tamamlayan primerlerin kullanıldığı PCR’dır.
Ters transkriptaz kullanarak RNA’dan DNA’ya ters kopya çıkarımı aracılığıyla tamamlayıcı DNA (cDNA) yaratılımını sağlar.
Tam olarak okunduğu gibidir. Tek, izole edilmiş, çözünmüş hücre ile yapılan PCR’dır.
Uygun olandan daha yüksek bir tavlama ısısıyla başlar ve her döngüde ısıyı uygun olan seviyeye indirir ve bu da sonucun daha iyi olmasını sağlar.
Kantitatif PCR’da (aynı zamanda gerçek zamanlı PCR, RT PCR ya da qRT PCR olarak da bilinir), DNA ya da RNA molekülleri ışınır sondalar kullanılarak işaretlenir. Böylece çoğaltılmış ürünlerin konsantrasyonu izlenebilir ve ışınırlığın yoğunluğu takip edilerek gerçek zamanlı olarak sayım yapılır.
Belli bir sayıda primer çiftleri kullanarak tek bir örnekteki belli sayıdaki fragmanın analiz edilebilmesini sağlar.
Multipleks PCR testi klasik PCR testi ile aynı basamaklara sahiptir ve birden fazla primer çifti kullanılarak tek reaksiyonda incelenen DNA’daki birçok parçayı analiz edebilmektedir. Örnek olarak Klasik PCR testinde tek bir virüs bulunabilirken Multipleks PCR’da birçok çeşit virüs ve bakteri bulunabilmektedir.

HIV RNA PCR Testi Güvenirliği

Şüpheli cinsel ilişki sonrası HIV / aids bulaşmasının saptanabilirliği ilk 10 gün boyunca imkansızdır. HIV RNA PCR testi bulaşmadan 9 ila 11 gün sonrasında bulaşmayı tespit edebilmektedir ve bu yüzden de erken teşhiste büyük öneme sahiptir. Şüpheli cinsel ilişkiden 9 ila 11 gün arasında yapılan HIV RNA PCR testinin %100 doğruluk payı olmasa da erken teşhis koyabilen tek testtir. Ancak bulaşmadan 28 gün sonra doğru sonuç alma olasılığı %100’dür.

HIV RNA PCR testinin Elisa testinden farkı virüsün direk genetik materyaline bakıyor olmasıdır. Bu test ile virüsün genetik yapısı çoğaltılır ve virüsün RNA dizimini ölçülebilecek ve saptanabilecek seviyeye çıkarır.

Etiketler:

BU KONUYU SOSYAL MEDYA HESAPLARINDA PAYLAŞ

Yorumlar

Henüz yorum yapılmamış.